以下是天正信達關于?小鼠Ⅱ型前膠原羧基端原肽(PIICP)試劑盒實驗原理? 的詳細解析,綜合相關搜索結果整理:
一、核心實驗原理?
雙抗體夾心法(Sandwich ELISA)?
將抗PIICP單克隆抗體預先包被于酶標板上,形成固相抗體?。
樣本中的PIICP與固相抗體結合后,加入生物素標記的抗PIICP二抗,形成“抗體-抗原-抗體"復合物?。
通過鏈霉親和素-辣根過氧化物酶(SABC/HRP)系統(tǒng)放大信號,TMB顯色后測定OD值?。
定量依據(jù)?
PIICP濃度與OD值呈正比,通過標準曲線計算樣本濃度?。
二、關鍵實驗步驟?
樣本處理?
血清/血漿需避免溶血或脂血干擾,建議離心后取上清?。
組織勻漿需充分裂解并去除沉淀?。
標準曲線制備?
標準品梯度稀釋(如50ng/mL起始,倍比稀釋至0.781ng/mL)?。
顯色與終止?
TMB顯色液反應后,硫酸終止變黃,450nm測OD值?。
三、注意事項?
溫度控制?:試劑需恢復至室溫使用,避免反復凍融?。
洗滌充分?:避免殘留未結合物導致假陽性?。
批間差異?:不同品牌試劑盒標準曲線可能需獨立驗證?。
四、應用場景?
骨代謝研究?:PIICP水平反映Ⅱ型膠原合成速率,用于骨關節(jié)炎模型評估?。
纖維化監(jiān)測?:如肺纖維化中膠原代謝異常檢測?。
如需進一步優(yōu)化實驗條件,可參考廠商提供的標準操作流程(SOP)?。
注:以上資料僅供參考,具體請咨詢品牌供應商或技術老師。
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