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小鼠Ⅱ型前膠原羧基端原肽(PIICP)試劑盒實驗原理

更新時間:2025-08-21  |  點擊率:174

  

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  一、核心實驗原理?

  雙抗體夾心法(Sandwich ELISA)?

  將抗PIICP單克隆抗體預先包被于酶標板上,形成固相抗體?。

  樣本中的PIICP與固相抗體結合后,加入生物素標記的抗PIICP二抗,形成“抗體-抗原-抗體"復合物?。

  通過鏈霉親和素-辣根過氧化物酶(SABC/HRP)系統(tǒng)放大信號,TMB顯色后測定OD值?。

  定量依據(jù)?

  PIICP濃度與OD值呈正比,通過標準曲線計算樣本濃度?。

  二、關鍵實驗步驟?

  樣本處理?

  血清/血漿需避免溶血或脂血干擾,建議離心后取上清?。

  組織勻漿需充分裂解并去除沉淀?。

  標準曲線制備?

  標準品梯度稀釋(如50ng/mL起始,倍比稀釋至0.781ng/mL)?。

  顯色與終止?

  TMB顯色液反應后,硫酸終止變黃,450nm測OD值?。

  三、注意事項?

  溫度控制?:試劑需恢復至室溫使用,避免反復凍融?。

  洗滌充分?:避免殘留未結合物導致假陽性?。

  批間差異?:不同品牌試劑盒標準曲線可能需獨立驗證?。

  四、應用場景?

  骨代謝研究?:PIICP水平反映Ⅱ型膠原合成速率,用于骨關節(jié)炎模型評估?。

  纖維化監(jiān)測?:如肺纖維化中膠原代謝異常檢測?。

  如需進一步優(yōu)化實驗條件,可參考廠商提供的標準操作流程(SOP)?。

  注:以上資料僅供參考,具體請咨詢品牌供應商或技術老師。

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