大鼠腫瘤壞死因子β(TNF-β)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)使用說明書

　　BS-3008 大鼠腫瘤壞死因子β(TNF-β)ELISA試劑盒

　　以下是?大鼠腫瘤壞死因子β(TNF-β)ELISA試劑盒?的實(shí)驗(yàn)使用說明書綜合整理：

　　一、實(shí)驗(yàn)原理?

　　采用?雙抗體夾心法?或?固相夾心法?ELISA技術(shù)。通過包被抗體捕獲樣本中的TNF-β，再與酶標(biāo)抗體形成復(fù)合物，經(jīng)TMB顯色后，顏色深淺與TNF-β濃度成正比。

　　二、試劑盒組成?

　　核心組分?：

　　預(yù)包被微孔板(96孔)

　　標(biāo)準(zhǔn)品(濃度梯度：15.6~1000 pg/mL，凍干品需復(fù)溶)

　　酶標(biāo)抗體(HRP標(biāo)記)

　　顯色底物(TMB A/B)

　　終止液(2N H?SO?)

　　濃縮洗滌液(20×~30×)

　　需自備器材?：

　　酶標(biāo)儀(450nm)、移液器(10~1000μL)

　　37℃恒溫箱、離心機(jī)(2000~5000×g)

　　三、樣本處理?

　　血清/血漿?：全血室溫靜置2小時(shí)后離心(1000×g，20分鐘)，避免溶血或脂血。

　　組織勻漿?：按1:9(重量:體積)加入PBS勻漿，離心取上清。

　　保存?：短期存于4℃，長(zhǎng)期需分裝凍存于-20℃(避免反復(fù)凍融)。

　　四、操作步驟?

　　試劑準(zhǔn)備?：

　　復(fù)溫：所有試劑室溫平衡30分鐘。

　　稀釋洗滌液(如20×→1×)。

　　標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?：

　　按說明書梯度稀釋(如1000→500→250 pg/mL)。

　　加樣與溫育?：

　　加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本(100μL/孔)，37℃孵育90分鐘。

　　洗滌3次(每孔加洗滌液靜置1分鐘后甩干)。

　　顯色與檢測(cè)?：

　　加TMB底物(90μL/孔)，避光反應(yīng)15分鐘→終止液(50μL/孔)。

　　酶標(biāo)儀讀取OD450nm值。

　　五、注意事項(xiàng)?

　　關(guān)鍵控制點(diǎn)?：

　　移液精度誤差≤2%，避免氣泡干擾。

　　顯色液需避光現(xiàn)配，終止液傾倒緩慢防濺。

　　數(shù)據(jù)計(jì)算?：

　　以標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合樣本濃度(推薦四參數(shù)邏輯曲線)。

　　保存條件?：

　　未開封試劑盒：2-8℃保存6個(gè)月;開封后板條需密封防潮。

　　六、常見問題?

　　顯色異常?：檢查底物是否過期或污染。

　　高背景值?：洗滌不或樣本濃度過高(需稀釋)。

　　注：以上資料僅供參考，如需具體品牌試劑盒的完整說明，可咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商的詳細(xì)文檔。